1、電泳液的性質(zhì):主要是指電極溶液和蛋白質(zhì)樣品溶液的pH值、離子強(qiáng)度和粘度等。
(a)pH值:溶液pH值決定帶電顆粒的解離程度,也即決定其帶凈電荷的量。對蛋白質(zhì)而言,溶液的pH值離其等電點(diǎn)越遠(yuǎn),則其帶凈電荷量就越多,從而泳動速度就越快。反之,則越慢。當(dāng)pH值等于其時(shí),凈電荷為0,μ也為0。因此電泳時(shí)應(yīng)選擇適宜的PH值,并需采用緩沖溶液,使溶液的pH值恒定.(b)溶液粘度:泳動度與溶液粘度是成反比關(guān)系。因此,粘度過大或過小,必然影響泳動度。一般一些經(jīng)驗(yàn)豐富的電泳師傅都知道,用手感覺一下電泳液就知道濃度是多少,以便來加油漆的多少。
2、顆粒性質(zhì):顆粒的直徑、形狀及所帶靜電荷量對泳動速度有較大影響。一般來說顆粒帶凈電荷量越多,或其形狀越接近球形,在電場中的泳動速度就越快。反之則越慢。
3、電滲:當(dāng)支持物不是絕對惰性物質(zhì)時(shí),常常會有一些離子基團(tuán)如羧基、磺酸基、羥基等吸附溶液中的正離子,使靠近支持物的溶液相對帶電。當(dāng)顆粒的泳動方向與電滲方向一致時(shí),則加快顆粒的泳動速度;當(dāng)顆粒的泳動方向與電滲方向相反時(shí),則降低顆粒的泳動速度。
4、離子強(qiáng)度:溶液的離子強(qiáng)度一般在0.02-0.2之間時(shí),電泳較合適。若離子強(qiáng)度過高,則會降低顆粒的泳動速度。其原因是,帶電顆粒能把溶液中與其電荷相反的離子吸引在自己周圍形成離子擴(kuò)散層。若離子強(qiáng)度過低,則緩沖能力差,往往會因溶液PH值變化而影響泳動的速率。
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