一般的核酸檢測(cè)只需要瓊脂糖凝膠電泳就可以;如果需要分辨率高的電泳,特別是只有幾個(gè)bp的差別應(yīng)該選擇聚丙烯酰胺凝膠電泳;用普通電泳不合適的巨大DNA鏈應(yīng)該使用脈沖凝膠電泳。注意巨大的DNA鏈用普通電泳可能跑不出膠孔導(dǎo)致缺帶。
瓊脂糖凝膠電泳是用瓊脂或瓊脂糖作支持介質(zhì)的一種電泳方法。對(duì)于分子量較大的樣品,如大分子核酸、病毒等,一般可采用孔徑較大的瓊脂糖凝膠進(jìn)行電泳分離。這是我做病毒檢測(cè)實(shí)驗(yàn)試劑盒的說(shuō)明書(shū)部分,看是否對(duì)你有幫助:
配制1%的膠進(jìn)行電泳
1 稱(chēng)取0.4g瓊脂糖放于錐形瓶中,再量取40ml的0.5×TBE溶液混合,放于微波爐中煮沸,至溶液清徹透明為止,大約需1分40秒。
2 冷卻到60℃時(shí)(放于掌心,能感覺(jué)到湯但又能忍受。)加2μl核酸染料,搖勻。
3 組裝好制膠器,并調(diào)至水平。將膠倒于制膠器中,插好梳子。待40分鐘膠冷卻凝固后,就可放于倒好電泳緩沖液的電泳槽中進(jìn)行點(diǎn)樣。
4 取5-10μl樣品溶液,加1-2μl 6×loading Dye,混合均勻后進(jìn)行點(diǎn)樣。每排點(diǎn)樣孔要點(diǎn)一個(gè)5μl的Marker。
5 點(diǎn)完后,調(diào)電泳儀各參數(shù)進(jìn)行電泳:U:80V;A;200A;T:40min。
電泳加工結(jié)束,凝膠成像系統(tǒng)觀察結(jié)果。
做實(shí)驗(yàn)需要注意的一點(diǎn)就是要戴手套操作,保護(hù)好自己。像如果用的核酸染料是EB、緩沖液是TAE的話,就要更加小心了,那玩意兒致癌性比較強(qiáng);像我們用的是GoldViewTM 核酸染料和TAE還不是特別要緊。
還有就是,這里說(shuō)的40ml制的一般都是25孔的中膠,你要根據(jù)所需要的孔數(shù)來(lái)按比例調(diào)節(jié)用量。膠不能制的太厚或者太薄,二者都不利于電泳的。
煮膠的時(shí)候,一定要讓膠完全溶解(拿起來(lái)對(duì)著光照看,沒(méi)有亮亮的小點(diǎn)出現(xiàn)),不然跑出來(lái)的膠不好看;煮的時(shí)間也不能太長(zhǎng),煮久了對(duì)樣品的回收這類(lèi)的可能有影響的。
電泳不僅運(yùn)用到工業(yè)上起了重大的作用,同時(shí)也被用到了生物,化學(xué),醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域!更多咨詢:
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